3-(2-硝基苯氧基)-1-丙胺的合成是由2-硝基苯酚鈉在無水DMF中，KI為催化劑與N-(3-溴丙基)鄰苯二甲酰亞胺反應(yīng)，合成2-[3-(2-硝基苯氧基)-丙基]二氫異吲哚-1，3-二酮(4a)，再經(jīng)肼解制得[10]。

由于N-(3-溴丙基)鄰苯二甲酰亞胺和生成物中的鄰苯二甲酰亞胺都能在堿性條件下水解，所以反應(yīng)不能在水中進行，要用無水溶劑。該方法操作要求較高，試劑較貴。我們以取代的2-硝基苯酚為原料，NaOH為堿，與1，3-二溴丙烷反應(yīng)制備3-芳氧基-1-溴丙烷，再經(jīng)Gabriel反應(yīng)合成3-芳氧基-1-丙胺，并對反應(yīng)條件進行了研究。取代的2-硝基苯酚與1，3-二溴丙烷的反應(yīng)可以在常規(guī)加熱和微波輻射加熱下進行[13]。

結(jié)果顯示，該步反應(yīng)在常規(guī)加熱下需要5h完成，在微波輻射加熱下只需10min就可結(jié)束，反應(yīng)速度明顯加快，收率有所提高。按文獻用常規(guī)加熱方法合成時，反應(yīng)液為兩相，通過劇烈攪拌和加入PTC使反應(yīng)加速，但1，3-二溴丙烷和3-芳氧基-1-溴丙烷的水解也加快，影響反應(yīng)收率。通過摸索研究發(fā)現(xiàn)，先在少量水中制成取代的2-硝基苯酚鈉，再加入1，3-二溴丙烷和四丁基溴化銨，經(jīng)超聲分散均勻后，置于微波反應(yīng)器中，功率130W，輻射10min反應(yīng)即可結(jié)束，收率較高。

功率為65W時反應(yīng)速度較慢，功率為300W時有聚合物生成。由于水量少，反應(yīng)基本上是在無溶劑下進行的，這樣既可以使反應(yīng)加快，又可以降低原料和生成物的水解，使收率增加。1，3-二溴丙烷具有兩個取代反應(yīng)點，能夠與取代的硝基苯酚鈉形成雙取代的產(chǎn)物，所以在反應(yīng)時加大1，3-二溴丙烷的投料量，以減少雙取代產(chǎn)物的生成，當取代的硝基苯酚與1，3-二溴丙烷的摩爾投料比為1∶2時，常規(guī)加熱和微波輻射加熱反應(yīng)時只有少量的雙取代產(chǎn)物生成。

化合物5a～5f的合成中，肼解生成的白色絮狀沉淀不溶于氯仿，反應(yīng)物經(jīng)過濾，減壓蒸出乙醇后，加氯仿溶解，再過濾，水洗滌即可得到3-芳氧基-1-丙胺。成鹽酸鹽時可直接在氯仿液中加適量濃鹽酸搖勻，減壓蒸出氯仿，殘留物加丙酮分散得到相應(yīng)的鹽酸鹽。

化合物4a～4f在測定HRMS(EI)時未能得到分子離子峰，4a～4f都給出了m/z180，160碎片離子峰，這與化合物結(jié)構(gòu)在鄰苯二甲酰亞胺片段中氮原子的β位及芳醚氧原子的α位容易發(fā)生裂解，形成包含鄰苯二甲酰亞胺片段的碎片離子峰一致。4a～4f元素分析結(jié)果與化合物的結(jié)構(gòu)完全吻合。所有化合物的結(jié)構(gòu)均經(jīng)FTIR，1HNMR，13CNMR，HRMS或元素分析確證。

目標化合物的生物活性及影響因素的討論

通過ELISA法測定不同濃度的目標化合物和biotinylatedTat-AcK50組氨酸競爭性地與固定在96孔板中的GST-fusionBRD結(jié)合，來確定目標化合物的體外抑制活性。測定結(jié)果見表1。體外抑制活性測定結(jié)果顯示，化合物5a～5f在較高濃度下，能夠抑制HIV-1AcTat的活性。但與N1-(2-硝基芳基)-1，3-丙二胺類鹽酸鹽的體外抑制活性相比，有了明顯的下降。

在詳細分析N1-(4-甲基-2-硝基苯基)-1，3-丙二胺鹽酸鹽(1b)與PCAFBRD復(fù)合物3D結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，認為該化合物的抑制活性主要來源于2-硝基與Y802和Y809的酚羥基相成氫鍵(d1＝2。85?，d2＝3。09?)，以及1，3-丙二胺支鏈末端銨鹽離子與E750的羧基離子形成的鹽橋作用(d＝2。92?)(圖2A)。2位硝基處于與苯環(huán)交叉位置，有利于與靶點中蛋白質(zhì)氨基酸殘基Y802和Y809的酚羥基形成氫鍵。

為了分析化合物5a～5f生物活性下降的原因，我們用軟件對化合物1b和5b的優(yōu)勢構(gòu)象進行計算，結(jié)果顯示1，3-丙二胺支鏈末端銨鹽離子均與2位硝基形成氫鍵。但化合物5b中氫鍵作用(d＝1。88?)(圖2B)要強于化合物1b(d＝2。25?)(圖2C)。

當化合物分子進入蛋白靶點后與蛋白質(zhì)中氨基酸殘基發(fā)生相互作用時，首先要破壞1b和5b中1，3-丙二胺支鏈末端銨鹽離子與2位硝基形成的氫鍵。由于化合物5b中氫鍵作用很強，難以斷開，因而影響了該化合物與靶點中蛋白質(zhì)氨基酸殘基的相互作用。

同時該氫鍵作用還影響到2位硝基的空間取向，使其幾乎處于與苯環(huán)共平面狀態(tài)，難以同時與靶點中蛋白質(zhì)氨基酸殘基Y802和Y809的酚羥基形成氫鍵作用。這些因素可能是造成3-芳氧基-1-丙胺類鹽酸鹽活性下降的主要原因。

研究表明，N1-(2-硝基芳基)-1，3-丙二胺類鹽酸鹽作為HIV-1Tat/PCAFBRD抑制劑具有高度的結(jié)構(gòu)專一性，改變?yōu)?-芳氧基-1-丙胺類鹽酸鹽時，活性有所下降。該研究對HIV-1Tat/PCAFBRD抑制劑的進一步優(yōu)化設(shè)計具有一定的指導(dǎo)意義。